مشکلات برشگیری با میکروتوم

مشکلات برشگیری با میکروتوم

هنگام مطالعه ی بافت توسط میکروسکوب ضخامت بافت مورد نظر باید به اندازه ای باشد ( در حد میکرون) که نور از آن عبور کند و بتوان با میکروسکوب آن را مطالعه کرد در غیر اینصورت هیچ تصویری در میکروسکوب دیده نخواهد شد.  بنابراین برای مطالعه روی بافت ها باید آنها را با ابزار خاصی به گونه ای با ضخامت بسیار پایین ( در حد میکرون)  برش داد که با میکروسکوب قابل رویت باشند.برش نمونه همراه با قالب پارافین توسط دستگاهی به نام میکروتوم  با ابعاد بسیار پایین به ضخامت 5 تا 10 میکرون ، به همین علت عمل برشگیری حساس تر از مراحل قبلی می باشد و باید به آرامی و با دقت انجام می شود.

تیز بودن تیغ های میکروتوم ارتباط مستقیمی با کیفیت برش ها دارد در مطالعات میکروسکوپی، برش ها نباید دچار خراش های طول و یا عدم یکنواختی به صورت عرضی باشند و ضخامت مناسب نیز داشته باشند. تیغ های دائمی باید به صورت دوره ای توسط ابزارهای مخصوص تیز شوند. نباید لبه ی تیغ در زیر میکروسکوپ قابل مشاهده باشد.

در ادامه تعدادی از مشکلات رایج در برشگیری از بافت با میکروتوم و همچنین علل این مشکلات ذکر شده است.

• برخی از مشکلات رایج

1. برش بسیار نازک

تنظیمات اشتباه میکروتوم، اعمال نفس گرم به بلوک های سرد برای تسریع برش، انتخاب اولین برش از مجموعه نواری، برش با سرعتهای بسیار بالا، اماده سازی ضعیف، عدم کالیبراسیون میکروتوم .

شکل1- برش بسیار نازک

2. خطوط چاقو:

چاقو و یا تیغ اسیب دیده، فرایند اماده سازی بافت ضعیف، وجود مواد سخت مانند کلسیم در بلوک، وجود ناخالصی در پارافین، رسوب نمک های بافری در نمونه

شکل2-وجود خطوط چاقو

3. گسیختگی:

فرایند اماده سازی ضعیف (عدم اب گیری کامل و یا شفاف سازی و غوطه وری ناکامل)، استفاده از حمام اب گرم بسیار داغ، پهن کردن خشن بافت

شکل3-گسیخته شدن بافت

4. ترک های ظریف:

اماده سازی بیش از حد بافت، بلوک بسیار سرد، برش بسیار سریع، قفل نشدن مکانیزم کلمپ، زاویه نامناسب

شکل4- ترک های ظریف در نمونه برش خورده

5. پیچش:

تکنیک فلوت ضعیف، فیکساسیون ضعیف، بلوک گرم، برش بسیار نازک، حمام اب گرم بسیار داغ

شکل5-وجود پیچش در نمونه برش خورده

6. فشردگی زیاد:

فرایند اماده سازی ضعیف، بلوک گرم، برش بسیار سریع، کیفیت پارافین ضعیف، لبه برش کند، زاویه زیاد

شکل6-فشردگی زیاد نمونه

7. وجود حباب:

وجود حباب در حمام غوطه وری، تکنیک های غوطه وری ضعیف

شکل7- وجود حباب زیر برش

8. پهن شدگی زیاد:

دمای حمام بسیار بالا، قرار گیری طولانی در اب، فیکساسیون ضعیف (باقی ماندن حلال)

شکل8-پهن شدگی زیاد نمونه

9. وجود الودگی:

اسلاید کثیف، حمام غوطه وری الوده، اثرات مداد برچسب گذاری

شکل9-وجود الودگی

 

پرسش های دیدسبز

• بهترین ضخامت برش بافت آندومتر چیست؟
• بهترین ضخامت برای برش بافت کبد چیست؟ 
• از نظر شما چالش برانگیز ترین بافت ها در مرحله ی برش کدامند؟

* لطفا نظرات خود را با ما به اشتراک بگذارید