قالبگیری با پارافین (امبدینگ)

قالبگیری

بافتها ، پس از فیکساسیون و آبگیری ، به سختی قابل برش به قطعات نازک تر هستند و عملا بدون یک تگیه گاه محکم نمی توان آنها را به شکل مطلوب برش زد. از این رو ، بافتها ابتدا باید در پارافین آغشته شوند و سپس در یک محیط قالبگیری مناسب قرار گیرند تا یک بلوک ایجاد کرده و بافت را در جای خود محکم نگه دارد. آغشته سازی و قالبگیری بافتها با استفاده از یک محیط معمولی انجام می شود اما گاهی اوقات از دو محیط مختلف برای این فرایندها استفاده می شود (قالبگیری دوگانه).

بلوک با سرد شدن در دمای اتاق یا در یخچال سفت می شود. انواع مختلفی از محیط های قالبگیری در آزمایشگاه هیستوپاتولوژی با توجه به ویژگی های بافت و آزمایشاتی که باید انجام شود وجود دارد.

ویژگی های یک محیط قالبگیری ایده آل

یک محیط قالبگیری در صورتی ایده آل در نظر گرفته میشود که شرایط و ویژگی های زیر را دارا باشد:

• نقطه ذوب محیط قالبگیری در حالت خالص باید زیر 65 درجه سانتی گراد باشد تا از آسیب رساندن به بافتها در اثر حرارت دادن در طول اشباع جلوگیری شود.
• محیط قالبگیری باید در دمای اتاق جامد باشد.
• ماده ی قالبگیری باید به داخل بافت ها نفوذ کند و با ماده ای که بافت در آن غوطه ور شده است جایگزین شود

انواع مختلف محیط های قالبگیری

1. موم پارافین – پارافین در دمای اتاق جامد است. نقطه ذوب پارافین بین 40 تا 60 درجه سانتی گراد متغیر است. برای کشورهای گرمسیری موم سخت با نقطه ذوب 58-60 درجه سانتی گراد مناسب است. این رایج ترین مورد برای بلوک کردن بافت است.
2. پاراپلاست – این ماده مخلوطی از پارافین تصفیه شده و پلاستیک است. انجام برش های سریالی 4 میکرونی با این محیط قالبگیری به دلیل خاصیت ارتجاعی آن بسیار آسان تر است.
3. ژلاتین – محلول در آب است و بنابراین مرحله ی آبگیری و شفاف سازی لازم نیست. برای بافتهای ظریف و بافت های یخ زده استفاده می شود. نقطه ذوب پایینی دارد.
4. موم استر-سخت تر از پارافین است اما دارای نقطه ذوب پایین 46-48 درجه سانتی گراد است. این ماده محلول در الکل است بنابراین نیازی به مرحله شفاف سازی در هنگام استفاده از این محلول قالبگیری بافت وجود ندارد.
5. Tissue mate– این ماده مخلوطی از پارافین و لاستیک است و خواص مشابهی با پاراپلاست دارد. برش های سریالی را می توان به راحتی با استفاده از این ماده قالبگیری بدست آورد.
6. واکسهای محلول در آب- این مواد پلی اتیلن گلیکول ، دارای نقطه ذوب 38-42 درجه سانتی گراد هستند. انقباض کمتری نسبت به پارافین ایجاد می کنند و نیازی به آبگیری و پاکسازی نیست. آ بافت ها را شکننده نمی کنند و حمایت بهتری نسبت پارافین دارند. برای بررسی چربی و آنزیم ها استفاده می شوند.
7. سلوئیدین – این ماده نیتروسلولز تصفیه شده است و برای نمونه های سخت و شکننده استفاده می شود. نمونه های بزرگ را می توان با استفاده از این محیط قالبگیری به راحتی برش داد. 2-3 هفته طول می کشد تا بافت ها با سلوئیدین آغشته شوند.

موم پارافین

پارافین مخلوطی از هیدروکربن است از شکستن دانه ی پارافین (یک روغن معدنی) تولید می شود. نقطه ذوب پارافین با کیفیت بالا 40-60 درجه سانتی گراد است. موم پارافین به دلیل خواصی که دارد بسیار محبوب است و تعداد زیادی بلوک را میتوان در زمان کمتری توسط آن آماده کرد. همچنین به فرایند بر کمک میکند و در مرحله ی رنگ آمیزی تداخلی در انجام فرایند ایجاد نمیکند.

مجموعه ای از بخش های بریده شده از بلوک پارافین به یکدیگر متصل میشوند و برش سریالی ایجاد میکنند که برش های سریالی راحت تر از برش های جداگانه هندل می شوند. موم پارافین در این ویژگی نسبت به سایر محیط های قالبگیری مانند نیتروسلولز دارای مزیت است.

برای احتیاط موم باید عاری از هرگونه گرد و غبار  و ناخالصی باشد و برای کاهش سایز بلورهای کریستالی موم باید سرعت انجماد بالایی داشته باشد(به سرعت سرد شود)

قالبگیری یا امبدینگ (embedding) عبارتست از جای دادن بافت در پارافین مذاب بطوریکه وقتی پارافین سفت می شود به صورت بلوک در آید و نمونه بافتی را در جهتی که باید بریده شود بطور محکم نگه دارد. برای قالب گیری از ظرف های مخصوصی استفاده می شود این ظرف ها انواع مختلف دارند ولی معمولا قطعات به شکل L لوکهارت است. این قالب ها از دو قطعه فلز برنجی یا الومنیومی درست شده است که وقتی کنار هم قرار میگیرند شکل یک چهار گوش را درست میکنند. بهتر است قالب گیری روی یک صفحه الومنیومی به ابعاد 30 *50 سانتی متر انجام شود.

امروزه تکنولوژی های جدید روش های دقیق تری را برای قالبگیری به ما عرضه می کنند. به عنوان مثال تیشوتک های پلاستیکی بدون درب (تیشوکاست) به سرعت درحال استفاده شدن هستند.

در این روش ابتدا پایه قالبگیری فلزی زیر شیر ریزش پارافین دستگاه پارافین دیسپنسر قرار می گیرد و مقدار بسیار کمی پارافین در داخل قالب ریخته می شود. سپس بافت داخل لایه ی پارافین بسته شده قرار گرفته و تیشوتک پلاستیکی بدون درب داخل آن قرار گرفته و پارافین به مقدار لازم داخل آن ریخته می شود.

• روش انجام کار:

• پارافین مذاب را توسط دستگاه wax dispenser در قالب می ریزیم.

• بوسیله پنس گرم بافت را به اهستگی در آن قرار میدهیم بطوریکه حبابی تشکیل نشود و سطح برش به طرف کف قالب قرار گیرد.

  

• شماره بافت را بر روی بافت قرار میدهیم.
• وقتی که پارافین کاملا سرد شد قالب را در اب فرو میبریم
• وقتی که پارافین کاملا سفت و سخت شد باید انرا از قالب جدا کرد.

  

توجه:

باید از هر طرف بیش از 3 میلی متر پارافین روی بافت قرار گیرد.

تیشوامبدینگ سنتر

همچنین شرکت دیدسبز برای سهولت در قالبگیری با ادغام دستگاه های مختلف مورد نیاز به اینکار، کنسولی مجهز و کاربردی به نام تیشوامبدینگ سنتر مجهز به مخزن پارافین ، کلد پلیت ، کلد اسپات ،هات پلیت، پنس حرارتی ، هات تانک ،چراغ روشنایی شیربا قابلیت تنظیم در 5سطح را طراحی و به مشتریا ارائه میدهد که مراحل قالبگیری را بیش از پیش تسهیل کرده است.

توجه:

بهتر است پارافین های مورد استفاده در دو مرحله غوطه وری و قالب گیری با هم متفاوت باشند. بهتر است از پارافین خالص برای مرحله غوطه وری استفاده شود تا تمام گزیلول از نمونه بافتی خارج شده و در مرحله قالب گیری بهتر است از مخلوط پارافین و افزودنی هایی جهت بهبود کریستالیته و انعطاف پذیری و در نتیجه برش بهتر استفاده گردد.

شرکت دیدسبز با تکیه بر آزمایشگاه های پیشرفته خود، بعد از انجام بررسی های لازم بهترین و مرغوب ترین نوع پارافین را برای هردو مرحله قالبگیری و پردازش بافت ارئه می نماید.

توجه:

عملکرد پارافین تحت تاثیر متغیرهای زیر است:

1. نقطه ذوب (بسته به وزن مولکولی و درصد افزودنی ها)
2. درجه پلیمریزاسیون (پایداری افزودنی ها)
3. دمای کارکرد (پایداری در غوطه ور سازی و قالب گیری)

توجه:

در حال حاضر پارافین های هیستولوژی تجاری مخلوطی از اجزاء زیر هستند:

1. پارافین
2. پلیمرها و رزین های هیدروکربنی (افزایش سختی و حمایت)
3. موم های میکروکریستالین (کاهش اندازه کریستال، تنظیم نقطه ذوب، افزایش چسبندگی)
4. افزودن DMSO (بهبود غوطه وری)

توجه:

طی تحقیقاتی در سال 2016 نشان داده شد که مخلوط پارافین و اتیلن وینیل استات (EVA) دارای دمای نرم شدگی مشابه پارافین است در حالیکه خواص فیزیکی آن مثل استحکام فشاری، خاصیت الاستیسیته و شدت کریستالیته با افزایش میزان EVA افزایش پیدا می کند. محیط اپتیمم بنابر کیفیت برش ها از طریق افزودن 5%وزنی اتیلن وینیل استات به پارافین بدست می اید.

برای قالبگیری از دستگاهی به نام توزیع کننده پارافین یا پارافین دیسپنسر استفاده می کنیم که با استانداردهای جهانی در شرکت دیدسبز قابل ارائه به مشتریان است.

منابع:

IMPREGNATION AND TISSUE EMBEDDING

برای مشاهده مقاله فیکساسیون (ثابت سازی ) بافت روی دکمه زیر کلیک کنید.

Click me!

پرسش های دیدسبز

• از نظر شما عواقب استفاده از پارافین نامرغوب برای قالبگیری بافت چیست؟

•  تیشوتک مناسب باید چه ویژگی هایی داشته باشد؟

• ریسک های استفاده از تیشوتک نامناسب برای قالبگیری چیست؟

• روش مورد استفاده ی شما برای گرم کردن پنس چیست؟

* لطفا نظرات خود را با ما به اشتراک بگذارید.